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流式分选

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一、简介:
      流式分选实验室目前配备流式细胞分选仪和流式分析仪共八台,旨在
为医学院、各大医院及社会机构提供包括样品前期制备、分析分选、数据
处理、培训和讲座在内的专业技术服务。

       
Beckman Coulter CytoFLEX S流式细胞分析仪           BD LSRFortessa™ X-20流式细胞分析仪      

二、服务项目:
细胞分析 通过流式分析仪快速检测多种荧光素标记细胞
1. 免疫学相关实验
      淋巴细胞亚型、功能分析、细胞活化、细胞因子检测、免疫细胞白细胞分化
抗原检测、白血病免疫分型、器官移植和骨髓移植后的患者免疫状态监测、血小
板功能及相关疾病、调节性T细胞Foxp3制备及检测分析。
2.细胞生物学相关实验
       细胞大小、细胞活性、细胞形态、细胞凋亡及凋亡相关蛋白、转染&基因沉
默效率检测、细胞周期和倍体分析、巨噬细胞吞噬实验、外泌体检测、细胞内pH
值、钙离子浓度测定、活性氧检测、膜电位、线粒体膜电位、细胞骨架成分、端
粒长度.

➢ 细胞分选 通过高速流式分选仪从复杂的细胞群体中快速分选得到高纯度的靶细胞
        多色标记的免疫细胞亚群分选、肿瘤干细胞分选、造血干细胞分选、GFP阳
性细胞分选、侧群SP细胞分选等,得到高活性、高纯度的目标细胞,继续无菌培
养,或用于下游PCR、RNA-Seq、FISH等实验。

三、应用实例:

                    
9色淋巴细胞亚型分析

  
                       Hoechst 33342染色检测DNA倍体
  
   
                 胚胎发育16.5天的肝脏造血干祖细胞分选
                 回测纯度发现分选细胞纯度可达到95%以上
   
                                 
                                                         淋巴细胞亚群分选
Naive T cell和effector/memory T cell回测纯度发现,分选细胞纯度都可达到98%以上

四、分选样品要求:
1. 分选细胞一定要保证全程无菌操作,本平台不接受有菌样本,上机前请将细胞
在生物安全柜中用无菌的滤膜(通常用40 m )过滤;
2. 上样细胞浓度:Aria Ⅱ 2×10 7 /mL,Moflo 2~4×10 7 /mL;
3. 分选结束后务必立即离心去掉上清,细胞换新鲜的培养液(第一周用双倍双抗
培养液,之后换正常培养液培养)。

五、分选接收管要求:
1. 分选时无菌接收管内都应放双倍双抗培养液以防污染;
2. 接收管内所加的培养液的量不做具体要求,如果需分选的细胞量大,可以加1ml
左右;如需分选的细胞量小,可以加3ml或者更多,以减少细胞从机器冲下来的力
度,减轻对细胞的损伤;
3. 如接收管是5mL的流式管,大约可以接收3×10 6 个细胞,如接收管是15mL的离
心管,大约可接收1×10 7 个细胞。

:双倍青霉素 ( Penicillin )的浓度为 : 200 units/mL , 双 倍 链 霉 素
(Streptomycin)的浓度为200 g/mL.
                                  

 

2021年3月22日 11:26
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